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产品中心 无柱分选 阴性分选

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Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

价格 ￥5,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K0014
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Mouse

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    1 mL Mouse Naïve CD4 T Cell Biotin-Antibody Cocktail

    1mL Streptavidin Beads

  • 分选能力

    适用于 1×10⁹ 总细胞量，最多可完成 100 次分选。

  • 分选原理

    在该负选流程中，通过生物素偶联的抗体标记非Naïve CD4 T细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育，非目的细胞通过抗体复合物与磁珠被标记，而目标Naïve CD4 T细胞保持未标记状态。随后将细胞悬液转移至聚苯乙烯试管中，并放置在分选器的磁场内。在磁场作用下，被磁性标记的非目标细胞吸附在试管管壁上，未被标记的Naïve CD4 T细胞则留存于上清液中。该上清液即为去除非目标细胞后的Naïve CD4 T细胞富集组分。

  • 磁珠粒径

    150 nm

  • 分选方式

    无柱分选

  • 分选策略

    阴性分选
背景介绍

  • Mouse Naïve CD4 T 细胞指从未接触过特异性抗原、处于静息状态的成熟CD4 T细胞。它是所有效应性CD4 T细胞（Th1/Th2/Th17/Treg 等）的共同前体，也是研究T细胞活化、分化与功能机制的模型。通过无柱式Mouse Naïve CD4 T细胞分选试剂盒，可快速纯化获得未接触抗体的初始CD4 T细胞。该方法在分选过程中仅去除非靶细胞，而不标记或激活目标初始CD4 T细胞，能够保留细胞的天然表型与功能完整性，适用于后续的细胞培养及功能学检测。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    1

    取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数;

    Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

    制备样本

    2

    用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

    Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Naïve CD4比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入10 μL Mouse Naïve CD4 T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL /100 μL

    4

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    5

    震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

    混匀5-30 s

    6

    加10 μL Streptavidin beads至样品中；

    10 μL/100 μL

    7

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

    本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

    室温孵育5min

    8

    加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

    总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

    9

    样品置于单孔磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

    单孔磁力架吸附10 min

    10

    倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

    Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

    细胞分选成功

    Note: 0.1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；


  • 验证数据

    • 采用Naïve CD4 T无柱式分选试剂盒，从小鼠脾细胞中富集Naïve CD4 T细胞。使用CD4-Pacific Blue、CD44-FITC、CD62L-Alexa Fluor® 647荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中Naïve CD4 T细胞（CD4+CD44-CD62L+）的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后Naïve CD4 T细胞纯度为95.5%。

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