CAR-T细胞疗法，全称为嵌合抗原受体T细胞疗法，是一种革命性的免疫治疗方法，CAR-T疗法通过基因工程技术将嵌合抗原受体（CAR）基因导入患者的T细胞中。CAR由单链可变片段（scFv）构成，能够识别并结合肿瘤细胞表面的特定抗原。当CAR-T细胞识别到肿瘤抗原后，会激活T细胞的杀伤功能，释放细胞毒素如穿孔素和颗粒酶，直接杀死肿瘤细胞。此外，CAR-T细胞还能通过释放细胞因子来激活其他免疫细胞，增强整体的抗肿瘤反应。CAR-T细胞疗法作为一种新兴的免疫治疗方法，在癌症治疗领域展现出巨大的潜力和广阔的应用前景。

CAR结构介绍

CAR的结构由三个主要部分组成：胞外域、跨膜域和胞内信号域。

• 胞外域

抗原结合域：通常由单链可变片段（scFv）构成，该片段由抗体的可变重链（VH）和可变轻链（VL）通过柔性接头连接而成。scFv赋予CAR特异性识别并结合靶抗原的能力。

铰链区：连接scFv和跨膜结构域，提供结构的灵活性和稳定性。铰链区的长度和来源（如IgG铰链或CD8α/CD28胞外区）会影响CAR的功能。

• 跨膜结构域

功能：将CAR锚定在细胞膜上，确保CAR的稳定表达。跨膜结构域的设计对CAR的表达水平和稳定性有重要影响。

• 胞内信号域

信号转导结构域：通常包含CD3ζ链，提供T细胞受体活化信号。

共刺激结构域：为了增强CAR-T细胞的活化和持久性，第二代CAR引入了共刺激结构域，如CD28或4-1BB。这些共刺激信号有助于改善CAR-T细胞的增殖和效应功能

CAR 结构示意图

G4S linker 和 Whitlow/218 Linker 是最常见的两种柔性接头

• G4S linker是一种常用的柔性氨基酸链，通常由甘氨酸（Gly，G）和丝氨酸（Ser，S）组成，序列为（GGGGSGGGGSGGGGS），简写为（G4S）3。这种序列不会导致特异性的二级结构形成，因此在蛋白质融合中被广泛使用。G4S linker 的主要功能是连接不同的蛋白质结构域，提供结构上的灵活性，以减少不同结构域之间的相互影响。在CAR细胞疗法中，G4S linker 用于连接单链可变片段（scFv）中的可变重链（VH）和可变轻链（VL），以形成一个灵活的结构。这种设计有助于提高CAR细胞的识别能力和功能。

• Whitlow/218 Linker 是一种常用的连接子序列，主要用于连接单链可变片段（scFv）中的可变重链（VH）和可变轻链（VL）。其序列是基于Whitlow等人在1993年发表的研究，旨在提高scFv的稳定性和功能性。Whitlow/218 Linker 的具体序列是GSTSGSGKPGSGEGSTKG。在CAR细胞治疗中，使用Whitlow/218 Linker 可以增加scFv对肿瘤抗原的亲和力。这对于CAR-T细胞的靶向能力和治疗效果非常重要，因为更高的亲和力意味着CAR T细胞能够更有效地识别和结合肿瘤细胞。同时有助于减少scFv的聚集和降解，从而提高CAR T细胞的稳定性和功能性。这对于维持CAR T细胞在体内的持久性和活性至关重要。

CAR 检测尤为重要

• 确保CAR-T细胞疗法的有效性
• 评估CAR表达水平：CAR检测可以定量分析CAR-T细胞中CAR的表达水平，即CAR阳性率，这是CAR-T细胞产品活性的关键特征。CAR表达水平直接影响CAR-T细胞的靶向性和杀伤能力，只有达到一定的阳性率，CAR-T细胞才能有效识别并杀伤肿瘤细胞。
• 监测CAR-T细胞扩增和持久性：在CAR-T细胞输注后，通过检测体内CAR的表达情况，可以评估CAR-T细胞的扩增程度和在体内的持久性。这对于判断治疗效果和预测疗效持续时间至关重要
• 保障CAR-T细胞疗法的安全性
• 质量控制：CAR检测贯穿CAR-T细胞产品的整个开发周期，包括早期研发阶段CAR的表达确认、CMC质控阶段CAR细胞阳性率质控等。通过严格的质量控制，可以筛选出合格的CAR-T细胞产品，避免因CAR表达异常或污染等问题导致的治疗风险。
• 检测潜在的耐药机制：在CAR-T细胞生产过程中，CAR有可能转染到白血病细胞上，导致治疗性CAR-T细胞与白血病细胞混在一起，从而引发复发。通过CAR检测，可以及时发现这种情况，采取相应的措施，保障治疗的安全性.
• 支持CAR-T细胞疗法的临床研究和优化
• 药代动力学研究：CAR检测可以用于监测CAR-T细胞在体内的药代动力学（PK）过程，即随着时间推移，CAR-T细胞在体内的分布、代谢和排泄情况。这为评估治疗反应和相关副作用提供了有价值的信息，有助于优化CAR-T细胞疗法的剂量和给药方案。
• 探索新的治疗靶点和组合：在临床试验中，通过检测不同靶点的CAR-T细胞的表达情况和疗效，可以发现新的治疗靶点和治疗组合。

不同CAR 检测方法比较

特异性针对G4S linker和Whitlow/218 Linker 的单克隆抗体可以用于检测和分析含有该连接子的CAR-T等细胞。这在CAR-T等细胞治疗的研究和开发过程中非常有用。斯达特提供G4S linker和Whitlow/218 Linker 系列流式抗体用于CAR 阳性率检测和功能评估。除此之外 斯达特还提供针对CAR的ADA 抗体定制。欢迎大家选购！