摘要：本研究旨在调查不同化疗敏感度的卵巢上皮癌组织中hMSH2基因的表达情况，并分析其与化疗耐药和预后的相关性。从手术中获取了80例新鲜卵巢上皮癌组织。采用ATP肿瘤化疗药物敏感性试验（ATP-TCA）评估卵巢癌组织对八种药物（紫杉醇、卡铂、拓泊替康、多西他赛、吉西他滨、环磷酰胺体内代谢产物、依托泊苷及博来霉素）的体外敏感性。分别使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测80例卵巢上皮癌组织中hMSH2基因的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，在紫杉醇耐药的卵巢上皮癌组中，hMSH2基因的mRNA和蛋白表达水平均显著高于敏感组（P < 0.01）。同样，在卡铂、拓泊替康和多西他赛耐药组中，hMSH2的表达水平也明显高于敏感组（P < 0.05）。hMSH2基因的相对表达值与卡铂、拓泊替康和多西他赛的敏感度系数呈显著相关性（P ≤ 0.05）。早期卵巢癌组织中的hMSH2表达水平显著低于晚期卵巢癌组织（P < 0.05）。高、中分化卵巢癌组织中的hMSH2蛋白表达水平显著低于低分化卵巢癌组织（P = 0.000）。此外，原发性卵巢癌组织中的hMSH2表达水平显著低于复发性卵巢癌组织（P < 0.01）。总之，hMSH2基因的高表达与卵巢上皮癌的化疗耐药和不良预后相关。化疗可能诱导hMSH2基因的高表达，而下调hMSH2基因的表达可能是逆转肿瘤耐药的新途径。

一、引言

卵巢上皮癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤之一，通常在晚期才被诊断出来，具有较高的复发率和不良预后。化疗是卵巢上皮癌治疗的重要手段，但耐药性的产生仍是成功治疗的重大障碍。了解化疗耐药的分子机制对于改善卵巢癌患者的治疗效果至关重要。

hMSH2基因是DNA错配修复（MMR）系统的关键组成部分，在维持基因组稳定性方面发挥着重要作用。hMSH2的表达异常与多种癌症有关，包括卵巢癌。然而，hMSH2基因表达与卵巢上皮癌化疗耐药之间的关系仍知之甚少。本研究旨在调查不同化疗敏感度的卵巢上皮癌组织中hMSH2基因的表达情况，并探讨其与化疗耐药和预后的相关性。

二、材料与方法

（A）组织样本

从手术中收集了80例新鲜卵巢上皮癌组织。记录了患者的临床和病理数据，包括年龄、肿瘤分期、分化程度和复发状态。

（B）化疗敏感性测试

采用ATP-TCA评估卵巢癌组织对八种药物（紫杉醇、卡铂、拓泊替康、多西他赛、吉西他滨、环磷酰胺体内代谢产物、依托泊苷及博来霉素）的体外敏感性。根据肿瘤生长抑制率评估肿瘤组织对每种药物的敏感性。

（C）RNA提取和实时荧光定量PCR

使用TRIzol试剂从卵巢上皮癌组织中提取总RNA。进行逆转录以合成cDNA。使用针对hMSH2基因和β-actin（作为内参基因）的特异性引物进行实时荧光定量PCR。采用2^(-ΔΔCt)方法计算hMSH2基因的相对表达水平。

（D）蛋白质提取和蛋白质印迹法

从卵巢上皮癌组织中提取总蛋白质。使用BCA蛋白质测定试剂盒测定蛋白质浓度。将等量的蛋白质进行SDS-PAGE电泳并转移到PVDF膜上。将膜与针对hMSH2和GAPDH（作为内参蛋白）的一抗孵育，然后与二抗孵育。使用增强化学发光检测系统可视化蛋白质条带，并使用ImageJ软件量化相对蛋白质表达水平。

（E）统计分析

使用SPSS软件进行统计分析。采用t检验或单因素方差分析比较不同组之间hMSH2基因表达的差异。使用Pearson相关系数分析hMSH2基因表达与药物敏感度系数之间的相关性。P值小于0.05被认为具有统计学意义。

三、结果

（A）化疗敏感性测试结果

卵巢上皮癌组织对八种药物表现出不同程度的敏感性。根据化疗敏感性测试结果，将样本分为每种药物的敏感组和耐药组。

（B）不同化疗敏感度组中hMSH2基因的表达水平

在紫杉醇耐药的卵巢上皮癌组中，hMSH2基因的mRNA和蛋白表达水平均显著高于敏感组（P < 0.01）。同样，在卡铂、拓泊替康和多西他赛耐药组中，hMSH2的表达水平也明显高于敏感组（P < 0.05）。然而，在吉西他滨、环磷酰胺体内代谢产物、依托泊苷和博来霉素的敏感组和耐药组之间，hMSH2的表达水平无显著差异。

（C）hMSH2基因表达与药物敏感度系数的相关性

hMSH2基因的相对表达值与卡铂、拓泊替康和多西他赛的敏感度系数呈显著负相关（P ≤ 0.05），表明hMSH2表达水平越高，药物敏感性越低。

（D）不同临床和病理组中hMSH2基因的表达水平

早期卵巢癌组织（I-II期）中的hMSH2表达水平显著低于晚期卵巢癌组织（III-IV期）（P < 0.05）。高、中分化卵巢癌组织中的hMSH2蛋白表达水平显著低于低分化卵巢癌组织（P = 0.000）。此外，原发性卵巢癌组织中的hMSH2表达水平显著低于复发性卵巢癌组织（P < 0.01）。

四、讨论

本研究表明，hMSH2基因的高表达与卵巢上皮癌的化疗耐药相关。耐药卵巢癌组织中hMSH2表达的增加表明hMSH2可能在化疗耐药的发展中发挥作用。DNA MMR系统负责纠正DNA复制过程中的错误，MMR基因的失调可导致基因组不稳定性和突变积累，这可能有助于耐药性的产生。

hMSH2基因表达与卡铂、拓泊替康和多西他赛的敏感度系数之间的显著相关性进一步支持了hMSH2参与化疗耐药的观点。这些药物常用于卵巢癌的治疗，了解其耐药的机制对于提高治疗效果至关重要。

不同临床和病理组之间hMSH2表达水平的差异也为hMSH2在卵巢上皮癌预后中的意义提供了有价值的见解。在晚期、低分化和复发性卵巢癌组织中观察到较高的hMSH2表达水平，表明hMSH2过表达可能与更具侵袭性的疾病进程和不良预后相关。

化疗可能作为应激反应诱导hMSH2基因的高表达。化疗药物引起的DNA损伤可能激活MMR系统，导致hMSH2表达增加。然而，MMR系统的长期或过度激活可能导致毒性中间产物的积累和凋亡抵抗的诱导，从而有助于耐药性的产生。

下调hMSH2基因的表达可能是逆转肿瘤耐药的新途径。靶向hMSH2基因或其相关信号通路可能增强卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性，并改善治疗效果。

五、结论

总之，本研究提供了证据，表明hMSH2基因的高表达与卵巢上皮癌的化疗耐药和不良预后相关。化疗可能诱导hMSH2基因的高表达，而下调hMSH2基因的表达可能为逆转肿瘤耐药提供新的策略。需要进一步研究以阐明其潜在机制，并探索靶向hMSH2在卵巢癌治疗中的潜在治疗应用。