嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-cell, CAR-T）疗法是肿瘤免疫治疗领域的革命性突破。CAR是一种通过基因工程技术获得的嵌合蛋白，主要由细胞外抗原识别域、铰链区、跨膜结构域以及细胞内信号转导结构域三部分组成。其中，细胞外抗原识别域通常采用单克隆抗体来源的单链可变片段（single-chain variable fragment, scFv），负责特异性识别肿瘤细胞表面的靶抗原。

scFv由抗体重链和轻链的可变区通过柔性肽段连接而成，在保留抗原结合能力的同时显著缩小了分子尺寸，便于整合入CAR construct中。目前CAR-T疗法主要靶向B细胞谱系特异性抗原，如CD19和BCMA（B细胞成熟抗原）。

CAR-T细胞疗法的核心优势在于其能够将T细胞的细胞毒性功能重定向至表达特定肿瘤抗原的靶细胞。然而，CAR-T细胞的临床应用面临着诸多挑战，其中之一便是对其在体内的分布、持久性和功能状态的精准监测需求——这正是抗CAR抗体发挥关键作用的领域。

抗CAR抗体是指能够特异性识别并结合CAR分子特定结构域的抗体试剂。根据识别表位的不同，抗CAR抗体可分为两类：

• 抗独特型抗体（Anti-idiotype antibody）：特异性识别scFv的抗原结合位点（即独特型表位），具有极高的特异性。这类抗体能够模拟靶抗原与CAR的结合方式，是CAR检测的金标准工具。
• 抗linker/框架抗体：识别CAR分子中非抗原结合区域（如铰链区或linker序列），可用于更广泛地检测不同类型的CAR构建体。

抗CAR抗体的开发通常采用以CAR的scFv区域或表达CAR的细胞作为免疫原，通过杂交瘤技术或噬菌体展示技术筛选获得特异性单克隆抗体。

FMC63是一种靶向人CD19的鼠IgG2a单克隆抗体。FMC63 scFv是目前CD19特异性CAR中最广泛使用的胞外抗原识别结构域。以FMC63 scFv为基础的CAR-T产品包括已获FDA批准的Kymriah®（tisagenlecleucel）、Yescarta®（axicabtagene ciloleucel）、Tecartus®（brexucabtagene autoleucel）和Breyanzi®（lisocabtagene maraleucel）。

斯达特 Anti-FMC63 scFv抗体（克隆号S-5031等）是针对FMC63 scFv区域的特异性抗体。这类抗体经充分验证可用于流式细胞术（Flow Cytometry）检测Anti-CD19（FMC63）CAR的表达。FMC63 scFv与CD19抗原结合的亲和力已被多项结构生物学研究阐明。冷冻电镜结构解析揭示了FMC63与CD19的抗原识别机制，为理解CAR-T细胞的功能调控提供了分子基础。

验证数据：

图 1 Flow cytometric analysis of FMC63 expression on CAR (FMC63 scFv) transfected Jurkat (human T cell leukemia T lymphocyte). CAR (FMC63 scFv) transfected Jurkat were stained with APC Mouse IgG1, k Isotype Control (left panel) or SDT APC Mouse Anti-FMC63 Antibody (right panel) at 1.25 μl/test.

2C6是一种靶向人CD20的人单克隆抗体。CD20（cluster of differentiate 20）是一种表达于B细胞表面的蛋白，从前B细胞阶段开始表达，直至骨髓和外周中的成熟B细胞，但不在造血干细胞、pro-B细胞或正常浆细胞上表达。这一表达谱使CD20成为B细胞恶性肿瘤的理想靶点。

2C6的scFv区域已被用于开发CD20特异性CAR-T细胞，并应用于临床试验。斯达特Anti-Human 2C6 scFv抗体（克隆号S-5413）能够特异性结合CD20特异性人单克隆抗体2C6的scFv区域。该抗体经FITC等荧光染料标记后，可通过流式细胞术高效检测CD20 CAR-T细胞的表达。

验证数据：

图 2 Flow cytometric analysis of 2C6 expression on CAR (2C6 scFv) transfected 293F (human embryonic kidney epithelial cell) (right panel) or 293F (left panel) was stained with anti-human 2C6 scFv (Anti-CD20 CAR-T) Recombinant Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) at 2 μl/test.

Leu16 是另一个非常经典靶向CD20的单克隆抗体,可以特异性识别 B 细胞表面标志物 CD20（MS4A1）。其抗原结合表位位于 CD20 分子的大胞外环（large extracellular loop, ECL2）上，核心识别区域为 ¹⁷⁰ANPSE¹⁷⁴基序附近的构象表位，与利妥昔单抗（Rituximab）表位存在部分重叠，同属 I 型抗 CD20 抗体类别。Leu16 是 CD20 研究领域的经典克隆号之一，其 scFv 形式保留了完整的抗原特异性与亲和力，分子量小（约 27 kDa）、组织穿透性强，是构建 CAR、双特异性抗体等工程化分子的常用抗原识别模块。

斯达特Anti-Mouse Leu16 scFv 抗体(克隆号:S-5469)能够高效特异性结合Leu16 scFv片段,提供了FITC等多种荧光标记,可通过流式平台检测CAR 阳性率。Leu16 scFv 在靶向 CD20 CAR-T 中的应用极为广泛，是目前 CD20 CAR-T 产品中最经典的抗原识别结构域之一，已进入多项临床试验。该 scFv 通常与 CD8α 铰链区及跨膜区、4-1BB 或 CD28 共刺激结构域、CD3ζ 信号域串联，构建第二代 CAR 分子，转导原代 T 细胞后可特异性识别并杀伤 CD20 阳性的 B 细胞恶性肿瘤细胞（如非霍奇金淋巴瘤、急性 B 淋巴细胞白血病等）。

验证数据：

图 3 Flow cytometric analysis of Leu16 expression on CAR (Leu16 scFv) transfected 293F (human embryonic kidney epithelial cell) (right panel) or 293F spiked with PBMCs (human peripheral blood mononuclear cells) (left panel). The cells were stained with Anti-Mouse Leu16 scFv (Anti-CD20 CAR) Recombinant Rabbit mAb (FITC Conjugate) at 2μl/test.

C11D5.3是一种靶向BCMA的鼠IgG1单克隆抗体。BCMA是一种选择性地表达于B细胞谱系细胞（包括多发性骨髓瘤细胞和浆细胞）表面的蛋白。C11D5.3 scFv是目前BCMA特异性CAR中最常用的胞外抗原识别组件。

Anti-Mouse C11D5.3 scFv抗体（如克隆号S-5414）能够特异性结合BCMA特异性鼠单克隆抗体C11D5.3的scFv区域。该抗体经Alexa Fluor 647等荧光染料标记后，可用于流式细胞术检测BCMA CAR-T细胞的表达。C11D5.3 scFv已被用于构建第二代CAR，包含CD8铰链和跨膜结构域、4-1BB共刺激结构域以及CD3ζ信号传导结构域。

验证数据：

图 4 Flow cytometric analysis of C11D5.3 expression on CAR (C11D5.3 scFv) transfected 293F (Human embryonic kidney epithelial cell) (right panel) or 293F (left panel) was stained with anti-Mouse C11D5.3 scFv (Anti-BCMA CAR-T) Recombinant Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) at 2 μl/test.

根据中国食品药品检定研究院2018年颁布的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》，CAR转染阳性率的检测应采用流式细胞术，推荐使用具有更好专属性的针对抗原结合部位的抗独特型抗体进行检测。抗CAR抗体相比重组靶抗原蛋白具有更高的特异性，能够避免因靶抗原与其他分子交叉反应而产生的假阳性信号。

在CAR-T细胞的生产过程中，抗CAR抗体可用于：

• 慢病毒包装后的滴度测定
• CAR基因转染/转导效率的检测
• CAR-T细胞成品的质控放行

抗CAR抗体可在临床研究中用于追踪过继转移后CAR-T细胞在患者体内的分布、扩增和持久性。通过对外周血样本进行流式细胞术分析，可定量检测CAR-T细胞在体内的数量变化，为剂量调整和疗效预测提供依据。

CAR-T细胞表面的CAR结构并非人体T细胞天然表达的受体，在回输后可能被宿主免疫系统识别为外来抗原，从而产生抗药抗体（Anti-Drug Antibody, ADA）。这种抗CAR免疫应答可能导致CAR-T细胞的加速清除，从而削弱治疗效果并增加重复给药的耐药风险。

抗独特型抗体与抗药抗体在结构上具有相似性，因此可作为免疫原性分析的重要参照工具，模拟ADA在人体内的产生情况。监管机构建议对CAR-T细胞疗法同时进行体液免疫和细胞免疫的原性评估。

值得注意的是，尽管抗CAR抗体的存在理论上可能影响疗效，但针对目前已批准的六种CAR-T产品的研究表明，抗CAR抗体并未对临床疗效产生显著影响。

抗CAR抗体作为CAR-T细胞疗法研发和临床转化中的重要工具试剂，其价值体现在以下方面：

• 标准化质控。随着CAR-T细胞疗法从自体个性化治疗向通用型（现货型）产品发展，建立标准化的CAR检测方法对于确保产品批间一致性和临床可重复性至关重要。
• 多靶点检测。传统的重组靶抗原蛋白检测方法受限于单一靶点，不适用于CAR-T筛选和临床前开发。而抗linker/框架抗体可识别不同CAR构建体中的共有序列，实现跨靶点的通用检测。
• 新型CAR结构的适配。随着双靶点CAR（如同时靶向CD19和CD20的CAR）、armored CAR等新型结构的涌现，对抗CAR抗体的设计要求也在不断提高，需要能够识别新型scFv组合或新引入的功能元件的特异性试剂。

斯达特抗CAR抗体一览：