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产品中心 酶制剂 试剂盒

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Fast PNGase F Kit

价格 ￥2,720.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 UA070119
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产品介绍

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产品规格

  • 储存条件

    Store at -25 ~ -15℃ for 2 years

背景介绍

  • PNGase F (N-糖苷酶 F)是一种来源于Elizabethkingia miricola酰胺水解酶， PNGase F通过水解天冬酰胺侧链的酰胺键（Asn-X-Ser/Thr，X≠Pro）释放完整的N-聚糖，同时将Asn转化为天冬氨酸（Asp）。与其他糖苷酶（如Endo H）不同，PNGaseF可切割所有类型的N-聚糖（高甘露糖型、杂合型、复杂型），但无法作用于O-连接糖链或核心α-1,3-岩藻糖修饰的植物/昆虫N-聚糖。该酶在糖蛋白研究、生物制药质量控制及蛋白质组学中具有重要应用。为了提高酶切实验的操作便利性，我们开发了Fast PNGase F Kit，简化了实验步骤，将实验时间缩短至20 min以内，大大提升实验效率。

产品组分

  • Constituent

    UA070119 -50 Rxns

    UA070119 -100 Rxns

    PNGase F

    50 μl

    100 μl

    5*Reaction Buffer

    200 μl

    400 μl


操作步骤

  • 1.两步法去糖基化
    1).参考下表在冰浴中配制如下反应体系：

    Component

    Volume

    Final Concentration

    Glycoprotein

    -

    10 μg/μl

    5 × Reaction Buffer

    2 μl

    1 ×

    ddH2O

    Up to 10 μl

    -

    用移液器轻轻吹打，充分混匀。
    2).变性反应：80ºC孵育2 min。
    3).去糖基化反应：反应完成后立即置于冰上冷却，冷却完成后加入1 μL PNGase F，50 ºC孵育10 min。
    2.一步法去糖基化
    1).参考下表在冰浴中配制如下反应体系：

    Component

    Volume

    Final Concentration

    Glycoprotein

    -

    10 μg/μl

    5* Reaction Buffer

    2 μl

    1 ×

    PNGase F

    1 μl

    -

    ddH2O

    Up to 10 μl

    -

    用移液器轻轻吹打，充分混匀。
    2).去糖基化反应：50 ºC孵育10 min。

注意事项

  • 推荐进行两步法酶切，可保证更高的酶切效率。

    本产品仅作科研用途。

    为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

  • 生物活性

    • Fast PNGase F Kit对RNaseB去糖基化的效果图。在10 μl反应体系中，加入10 μg RNaseB，80 ºC孵育2 min，冷却至室温后加入1U PNGase F，50ºC孵育10 min。以下为SDS-PAGE检测效果图。
      M Marker
      Lane 1阴性对照（未加PNGase F）；
      Lane 2 competitor；
      Lane 3 UA070119；

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